برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده پایان نامه درج نمی شود (در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است) تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه : (ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است) فهرست مطالب عنوان صفحه خلاصه فارسی ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 1 مقدمه …………………………………………………………………………………………………………………………………… 2 فصل اول:کلیات 1-1-1- بیان مسئله ……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 5 1-1-2-ضرورت های خاص ……………………………………………………………………………………………………………………………….. 7 1-1-3-اهداف عملی و کاربردی ……………………………………………………………………………………………………………………….. 7 1-1-4-پرسش های اصلی تحقیق …………………………………………………………………………………………………………………… 7 1-1-5-فرضیه ها ………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 8 1-2- غذاهای تخمیری و تاریخچه بشریت……………………………………………………………………………………………………….. 8 1-2-1- خصوصیات غذاهای تخمیری……………………………………………………………………………………………………………… 9 1-2-1-1- نگه داری……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 10 1-2-1-2- تغذیه……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 10 1-2-1-3- عملکرد…………………………………………………………………………………………………………………………………………… 10 1-2-1-4- خواص ارگانولپتیکی…………………………………………………………………………………………………………………….. 11 1-2-1-5- منحصر به فرد بودن…………………………………………………………………………………………………………………….. 11 1-2-1-6- ارزش اقتصادی…………………………………………………………………………………………………………………………….. 11 1-3- باکتری های لاکتیکی …………………………………………………………………………………………………………………………. 11 1-3-1- نقش باکتری های اسید لاکتیک در صنایع غذایی ……………………………………………………………………….. 13 1-3-2- متابولیسم باکتری های اسید لاکتیک …………………………………………………………………………………………… 14 1-3-2-1- باکتری های اسید لاکتیک هموفرمنتاتیو (همگن)……………………………………………………………………. 14 1-3-2-2- باکتری های اسید لاکتیک هتروفرمنتاتیو (ناهمگن)………………………………………………………………… 15 1-4- لاکتوباسیل ها………………………………………………………………………………………………………………………………………… 17 1-5- طبقه بندی لاکتوباسیل ها…………………………………………………………………………………………………………………….. 18 1-6- تاریخچه ی لاکتوباسیل ها ……………………………………………………………………………………………………………………. 19 1-7- محصولات . …………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 20 1-7-1- پنیر …………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 20 1-7-1-1- انواع پنیر ……………………………………………………………………………………………………………………………………… 20 1-7-1-2- ارزش غذایی پنیر…………………………………………………………………………………………………………………………. 20 1-7-2- ماست ………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 21 1-8- باکتریوفاژ ……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 22 1-8-1- نقش باکتریوفاژ در صنایع لبنی شیر ……………………………………………………………………………………………… 24 1-8-1-2- منابع اصلی آلودگی فاژی در کارخانجات صنایع لبنی ………………………………………………………………. 24 1-8-3- اثر باکتریوفاژها ………………………………………………………………………………………………………………………………… 24 1-8-4- تاریخچه کشف باکتریوفاژ ………………………………………………………………………………………………………………. 25 1-8-5- مورفولوژی باکتریوفاژ ها ………………………………………………………………………………………………………………… 26 1-8-6- طبقه بندی باکتریوفاژ …………………………………………………………………………………………………………………….. 28 1-8-7- مراحل ورود و تکثیر باکتریوفاژ ………………………………………………………………………………………………………. 30 1-8-7-1- مرحله جذب فاژ بر روی سلول باکتری ……………………………………………………………………………………… 30 1-8-7-2- مرحله ورود فاژ به داخل باکتری ……………………………………………………………………………………………….. 31 1-8-7-3- بیوسنتز ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 31 1-8-7-4- رسیدگی کامل …………………………………………………………………………………………………………………………… 31 1-8-8- منشا فاژ ………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 32 1-8-9- سیکل حیاتی فاژ ……………………………………………………………………………………………………………………………. 32 1-8-9-1- سیکل لیتیک ……………………………………………………………………………………………………………………….. 32 1-8-9-2- سیکل لیزوژنیک ………………………………………………………………………………………………………………………… 32 1-8-10- روش جداسازی فاژ ……………………………………………………………………………………………………………………… 34 1-8-10-1- روش مستقیم …………………………………………………………………………………………………………………………. 34 1-8-10-1-1-روش های میکروبیولوژی ……………………………………………………………………………………………………. 34 1-8-10-1-2- روش مولکولی ……………………………………………………………………………………………………………………. 34 1-8-10-2 روش غیر مستقیم سنتی …………………………………………………………………………………………………………. 35 1-8-10-2-1- تست فعالیت ……………………………………………………………………………………………………………………… 35 1-8-10-2-2- تست اندیکاتور ………………………………………………………………………………………………………………….. 35 1-8-10-2-3- فلوسایتومتری …………………………………………………………………………………………………………………… 35 1-8-10-2-4- امپدانس الکتریکی یا رسانایی شیر ………………………………………………………………………………….. 35 1-8-10-2-5- سنجش پلاک – لکه و رشد – توربیدومتری ……………………………………………………………………. 36 1-8-10-2-6- انواع PCR ………………………………………………………………………………………………………………………… 37 1-8-10-2-6-1- …..Mutiplex PCR………………………………………………………………………………………………………. 37 1-8-10-2-6-2- Quntitive PCR…………………………………………………………………………………………………………. 37 1-8-10-2-6-3- Traditional PCR ……………………………………………………………………………………………………. 38 1-8-11- کنترل فاژ ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 38 1-9- مقاومت انتی بیوتیک …………………………………………………………………………………………………………………………. 40 1-9-1- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل های پروبیوتیک …………………………………………………………………….. 42 1-9-2- انواع مقاومت آنتی بیوتیک ………………………………………………………………………………………………………….. 43 1-9-3- انتقال ژن های افقی لاکتوباسیل های پروبیوتیک ……………………………………………………………………….. 43 1-9-4- عوام ضد باکتریایی………………………………………………………………………………………………………………………….. 43 1-9-4-1- آنتی بیوتیک ها………………………………………………………………………………………………………………………….. 45 1-9-5- مکانیسم آنتی بیوتیک ها ……………………………………………………………………………………………………………… 45 1-9-5-1- آنتی بیوتیک ها ی ممانعت کننده از سنتز دیواره سلول………………………………………………………… 47 1-9-5-1-1- آنتی بیوتیک های بتالاکتام ………………………………………………………………………………………………… 48 1-9-5-2- مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک بتالاکتام ………………………………………………………………………………… 48 1-9-5-2-1- پنی سیلین ها …………………………………………………………………………………………………………………….. 49 1-9-5-2-2- سفالوسپورین ها و سفامایسین ها ……………………………………………………………………………………….. 50 1-9-5-2-3- گلیکوپپتیدها ……………………………………………………………………………………………………………………….. 51 1-9-5-2-4- پلی پپتید ها ……………………………………………………………………………………………………………………….. 51 1-9-5-2-5- ایزونیازید، اتیونامید، اتامبتول و سیکلوسرین ……………………………………………………………………… 52 1-9-5-3- انتی بیوتیک های مهار کننده سنتز پروتئین ………………………………………………………………………….. 52 1-9-5-3-1- آمینوگلیکوزید ها ………………………………………………………………………………………………………………… 52 1-9-5-3-2- تتراسایکلین ………………………………………………………………………………………………………………………. 54 1-9-5-3-2-1- مقاومت به تتراسایکلین ………………………………………………………………………………………………… 54 1-9-5-3-3- اگزازولیدین ……………………………………………………………………………………………………………………….. 54 1-9-5-3-4- کلرامفنیکل ………………………………………………………………………………………………………………………… 55 1-9-5-3-5- ماکرولیدها ………………………………………………………………………………………………………………………….. 55 1-9-5-3-5-1- مقاومت به ماکرولید ها …………………………………………………………………………………………………. 55 1-9-3-6- کلیندامایسین …………………………………………………………………………………………………………………………. 56 1-9-3-7- استرپتوگرامین ……………………………………………………………………………………………………………………… 56 1-9-5-4- آنتی بیوتیک های مهار کننده اسید نوکلوئیک ………………………………………………………………………. 57 1-9-5-4-1- کینولون ها …………………………………………………………………………………………………………………………. 57 1-9-5-4-2- ریفامپین و ریفابوتین ……………………………………………………………………………………………………….. 57 1-9-5-4-3- مترانیدازول ……………………………………………………………………………………………………………………….. 58 1-9-5-4-4- آنتی متابولیت ها ……………………………………………………………………………………………………………….. 58 1-9-6-1- اهمیت مقاومت آنتی بیوتیک ها در دام ………………………………………………………………………………… 59 فصل دوم: مروری بر متون گذشته 2-1- تاریخچه ………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 62 2-2- مطالعات انجام شده در باکتریوفاژ ………………………………………………………………………………………………….. 62 2-3- مقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها ……………………………………………………………………………………………. 64 فصل سوم: مواد و روش کار 3-1- دستگاه های مورد نیاز …………………………………………………………………………………………………………………….. 68 3-2- لوازم مورد نیاز ………………………………………………………………………………………………………………………………….. 69 3-3- مواد مورد نیاز ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 69 3-4- سویه های میکروبی مورد مطالعه ……………………………………………………………………………………………………… 71 3-4-2- آماده سازی محیط های کشت …………………………………………………………………………………………………….. 71 3-4-2-1- محیط های کشت MRS آگار ……………………………………………………………………………………………….. 72 3-4-2-2- محیط های کشت نرم MRS آگار ………………………………………………………………………………………… 72 3-4-2-3- محیط کشت MRS مایع ………………………………………………………………………………………………………. 72 3-5- کشت و آزمایشات تعین هویت باکتری ………………………………………………………………………………………….. 72 3-6- سنجش فاژ ……………………………………………………………………………………………………………………………………….. 73 3-6-1- روش دو لایه ای پلاک ………………………………………………………………………………………………………………… 73 3-6-2- مشاهده پلاک توسط القاء با پرتو UV ………………………………………………………………………………………. 73 3-6-3- آزمون Heap and Lawrence ………………………………………………………………………………………………… 74 3-7- سنجش حساسیت نسبت به آنتی بیوتیک ……………………………………………………………………………………… 75 3-7-2- آزمایش تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی به روش انتشار دیسک در آگار ( دیسک دیفیوژن) ….. 76 3-7-2-1- روش انجام آزمایش دیسک گذاری ……………………………………………………………………………………… 76 3-7-2-1-1- تهیه محیط کشت …………………………………………………………………………………………………………… 76 3-7-2-1-2- روش کار ………………………………………………………………………………………………………………………….. 77 فصل چهارم : نتایج 4-1- شرح مختصری از مطالعه ………………………………………………………………………………………………………………. 80 4-2- نتایج ……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 80 4-2-1- نتایج حضور یا عدم حضور فاژ در سویه ها ………………………………………………………………………………… 81 4-2-2- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء UV و میتومایسین C …………………………………………. 83 4-2-3- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با میتومایسین C و Heap and Lawrence ………….. 83 4-2-4- نتایج مشترک جداسازی فاژ در روش القاء با پرتو UV و Heap and Lawrence …………………… 84 4-3- نتایج حساسیت ومقاومت آنتی بیوتیکی لاکتوباسیل ها …………………………………………………………………. 84 4-4- نتایج میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه ها به آنتی بیوتیک ………………………………………………… 91 4-5-1- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به آمینوگلیکوزید ها 92 4-5-2- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سفالوسپورین ها .. 92 4-5-3- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به گلیکوپپتیدها ……. 93 4-5-4- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به لینکوزامید ها ……. 93 4-5-5- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به ماکرولیدها ………… 94 4-5-6- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به پنی سیلین ها ….. 94 4-5-7- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به کینولون ها ……….. 95 4-5-8- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به سولفانامید ها ……… 95 4-5-9- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به تتراسایکلین ها…….. 96 4-5-10- نتایج الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های لاکتوباسیل بومی نسبت به دیگر آنتی بیوتیک‌ها……………… 96 فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری 5-1- اهمیت جداسازی فاژ ………………………………………………………………………………………………………………………. 99 5-2- نتایج جستجو برای جداسازی فاژ …………………………………………………………………………………………………… 100 5-3- اهمیت الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی پروبیوتیک ها …………………………………………………………………… 102 5-4- راه های انتقال ژن های مقاومت به آنتی بیوتیکی در لاکتوباسیل ها ……………………………………………. 103 5-5- نتایج تفسیر برای الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی ………………………………………………………………………… 104 5-6- پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 109 منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 111 ضمائم پوسترهای ارائه شده در پانزدهمین کنگره بین المللی میکروب شناسی ایران ……………………………………… 121 خلاصه انگلیسی ………………………………………………………………………………………………………………………………………. 12۳ فهرست جداول جدول 1-1- مورفولوژی باکتریوفاژهای اسید لاکتیک ……………………………………………………………………………… 30 جدول 1-2- گروه های آنتی بیوتیکی و مکانیسم عمل آن ها …………………………………………………………………. 46 جدول 1-3- پنی سیلین ها و طیف اثر آن ها ………………………………………………………………………………………….. 49 جدول 1-4- مثال های انتخابی از سفالوپورین ها و سفامایسین و طیف اثر آن ها …………………………………. 50 جدول 1-5- ماکرولیدها وتتراساسکلین ……………………………………………………………………………………………………. 56 جدول1-6- کینولون ها ……………………………………………………………………………………………………………………………. 57 جدول 3-1- دستگاه های مورد استفاده در تحقیق به همراه مدل آن ها ………………………………………………. 68 جدول 3-2- مواد مورد نیاز در آزماشی به همراه کشور سازنده آن ها ……………………………………………………. 70 جدول 3-3- دیسک های آنتی بیوتیک مورد استفاده جهت آنتی بیوگرام در این مطالعه ……………………. 75 جدول 4-1- نتایج حضور یا فقدان فاژ در سویه ها با استفاده از 3 روش مختلف ………………………………….. 81 جدول 4-2- نتایج قطر هاله عدم رشد و الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی برای سویه های لاکتوباسیل بومی………. 85 جدول 4-3- میزان درصد حساسیت و مقاومت سویه های به آنتی بیوتیک ………………………………………….. 91 فهرست شکل ها شکل 1-1- روش تخمیر همولاکتیکی در باکتری های اسید لاکتیک …………………………………………………….. 16 شکل 1-2- تخمیر هترولاکتیکی باکتری های اسید لاکتیک …………………………………………………………………. 17 شکل 1-3- شمای کلی باکتریوفاژ …………………………………………………………………………………………………………… 23 شکل 1-4- سیکل حیاتی لیتیک و لیزوژنیک باکتریوفاژ ………………………………………………………………………… 33 شکل 3-1- پلاک ……………………………………………………………………………………………………………………………………. 74 شکل 3-2- اندازه گیری هاله عدم رشد …………………………………………………………………………………………………. 78 فهرست نمودارها 4-1- نمودار نتایج مقایسه 3 روش مختلف برای جداسازی فاژ …………………………………………………………….. 83 4-2-1- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به آمینوگلیکوزیدها ………. 92 4-2-2- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به سفالوسپورین ها………. 92 4-2-3- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به ونکومایسین …………… 93 4-2-4- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کلیندامایسین…………. 93 4-2-5- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به اریترومایسین…………. 94 4-2-6- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به پنی سیلین ها ………… 94 4-2-7- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کینولون ها………………….95 4-2-8- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کوتریماکسازول ………. 95 4-2-9- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به تتراسایکلین …………… 96 4-2-10- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به کلرامفنیکل و نیتروفورانتوئین………… 96 4-2-11- الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی سویه های بومی لاکتوباسیل نسبت به میتومایسین……….. 97