(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است) چکیده لینالول، مونوترپن الکلی است که در اسانس روغنی تعدادی از گیاهان آروماتیک وجود دارد. این ترکیب اثرات ضد التهابی، ضد درد و انواعی از اثرات بیولوژیک بر سیستم عصبی را داراست. در تحقیق حاضر، ما تکنیک ثبت داخل سلولی را برای مطالعه اثرات لینالول بر فعالیت نورون­های حلزون به کار بردیم. اعمال لینالول (mM 1/0) به سرعت فرکانس پتانسیل­های عمل خود­به­خودی را افزایش و شیب فاز رپلاریزاسیون و دوره و دامنه پتانسیل هایپرپولاریزان متعاقب را کاهش داد. لینالول همچنین دامنه پتانسیل­ عمل را کاهش داد اما به نظر می­رسد این تاثیر نتیجه دپلاریزاسیون آهسته غشاء باشد و نه مهار مستقیم کانالهای سدیمی زیرا با تثبیت ولتاژ استراحت غشاء در حدود کنترل (با تزریق مداوم جریان منفی) کاهش دامنه پتانسیل­های عمل هم حذف ­گردید. اعمال لینالول ( mM2/0) به تدریج الگوی فعالیت را از حالت منظم به فعالیت انفجاری تغییر داد که این الگوی فعالیت بعد از شستشو با رینگر نرمال به آهستگی برگشت­پذیر بود. فعالیت انفجاری در حضور نیفدیپین (مهارکننده اختصاصی کانالهای کلسیمی L-type) کاهش و در حضور نیکل کلرید (مهارکننده غیر اختصاصی کانالهای کلسیمی) حذف شد. افزودن H89 (مهارکننده­ پروتئین کینازA) و کلریترین (مهارکننده­ پروتئین کینازC) فعالیت انفجاری القاء شده توسط لینالول را حذف کرد و سبب بازگشت پتانسیل­های عمل منفرد و منظم شد. این نتایج پیشنهاد می­کند لینالول می­تواند فعالیت صرعی را بویژه از طریق مهار کانال­های پتاسیمی در نورون­های حلزون القاء نماید. به نظر می­رسد تاثیر مستقیم لینالول بر کانال­های یونی در تغییر فعالیت نورون­ها نقش داشته باشد که با شروع سریع تاثیر لینالول مطابقت دارد، اما با توجه به تاثیر مهارکننده­های پروتئین کینازها این تاثیر به تعدیل غیرمستقیم از طریق فسفریلاسیون کانال­های یونی نیز وابسته است. کلمات کلیدی: پتانسیل عمل، لینالول، نورون حلزون، فعالیت انفجاری، کانال‌های یونی فهرست مطالب عنوان……………………………………………………………………………………………………..صفحه فصل اول: مقدمه 1-1) بیان مساله ………………………………………………………………………………………………..2 1–2) دلایل استفاده از نورونهای حلزون ………………………………………………………..…… 5 فصل دوم: مروری بر تحقیقات پیشین 2-1) صرع ……………………………………………………………………………………………………… 8 2-2) اسانس­های گیاهی …………………………………………………………………..……………… 9 2-3) اثرات بیولوژیک اسانس های گیاهی………………………………………………………… 10 2-3-1) اثرات سیتوتوکسیک اسانس­ها ………………………………………………………….. 10 2-3-2) اثرات موتاژنیک اسانس­ها در سطح هسته و سیتوپلاسم ……………………… 10 2-3-3) اثرات انتی موتانژنیک اسانس­ها…………………………………………10 2-3-4) اثرات سرطان­زایی اسانس­ها…………………………………………….11 2-4) ترکیبات اسانس­ها و عملکرد آن­ها روی سیستم عصبی مرکزی و محیطی…… 11 2-4-1) اکالیپتول …………………………………………………………………………………………… 12 2-4-2) اوجنول ……………………………………………………………………………………………..13 2-4-3)منتول ………………………………………………………………………………………………. 13 2-4-4) سیترونلول ………………………………………………………………………………….……. 14 2-4-5) لینالول……………………………………………………………………………………………….15 2-5) کانال­های یونی و مشارکت آنها در فعالیت الکتریکی نورون ها…………………… 17 2-5-1)کانال های کلسیمی …………………………………………………………………………. ….17 2-5-2) کانالهای پتاسیمی ……………………………………………………………………….……. 19 2-5-2-1) کانال های پتاسیمی وابسته به ولتاژ ………………………………………………… 19 2-5-2-2) کانالهای پتاسیمی وابسته به کلسیم ………………………………………………. 20 2-5-3) کانالهای سدیمی ………………………………………………………………………. ……… 21 2-5-3-1) جریانهای سدیمی گذرا و مداوم ………………………………………..………….. 22 2-6) تعدیل کانال های یونی توسط فسفوریلاسیون ………………………………………… 23 2-6-1) گیرنده متابوتروپیک……………………… ……………………………………………………23 2-7) پروتئین کینازها……………………………………………………………………………………..25 2-7-1) PKA و اثر بر کانال های یونی ……………………………………………………..…….. 25 2-7-2) PKC و اثر بر کانال های یونی ……………………………………………………………. 27 فصل سوم: مواد و روش­ها 3-1) حیوانات ………………………………………………………………………………..……………… 30 3–2) تشریح و آماده سازی گانگلیون عصبی جهت ثبت …………………………………… 31 3-3) محلول­ها و داروها ………………………………………………………….……………………. 32 3-4) ثبت داخل سلولی ………………………………………………………………………………… 32 3-5) مراحل آزمایش ……………………………………………………………………….…………… 34 3-6) پارامترهای الکتروفیزیولوژیک مورد مطالعه …………………………………………… 34 3-7) آزمون آماری ………………………………………………………………………………………. 36 فصل چهارم: نتایج 4-1) ویژگی های فعالیت خودبخودی و برانگیخته نورون های حلزون در شرایط کنترل…………………………………………………………………………………………………………… 38 4-2) اثرات غلظت­های 1/0 و 2/0 میلی­مولار لینالول بر ویژگی­های الکتروفیزیولوژیک نورون­های حلزون ………………………………………………………………………………………….. 39 4-2-1) ویژگی های پتانسیل عمل خود بخودی در حضور لینالول 1/0 میلی مولار 39 4-2-2) ویژگی های پتانسیل عمل خودبخودی در حضور لینالول 2/0 میلی مولار .47 4-3) ویژگی های پتانسیل عمل خودبخودی در حضور لینالول و مهار کننده های کانال های کلسیمی نیکل کلرید و نیفدیپین …………………………………………………….. 51 4-4) ویژگی های پتانسیل عمل خودبخودی در حضور لینالول و مهارکننده­های پروتئین کینازها،کلریترین و H89 …………………………………………………………………… 53 فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری 5-1) بحث …………………………………………………………………………………………………….. 57 5-1-1) تغییر در ویژگی های پتانسیل عمل در حضور لینالول …………………………… 57 5-1-2) تغییر در فعالیت نورونی و بروز الگوی burst در حضور لینالول………..……….60 5-2) نتیجه گیری …………………………………………………………………………………………. 63 5-3) پیشنهادات برای مطالعات آینده ……………………………………………………………. 63 فهرست منابع و ماخذ …………………………………………………………………………………….. 65 فهرست شکل­ها عنوان…………………………………………………………………………………………………………صفحه شکل 3-1. حلزون باغی …………………………………………………………………………………. 30 شکل 3-2.گانگلیون تحت مری تثبیت شده در محفظه ثبت …………………………….. 31 شکل 3-3. نمایی از وسایل ثبت داخل سلولی ……………………………………………….. 33 شکل 3-4. نحوه اندازه گیری برخی پارامترهای پتانسیل عمل ………………………… 35 شکل4-1. الگوی فعالیت خودبخودی نورون در شرایط کنترل، 5 و 10 دقیقه پس از مجاورت با غلظت 1/0 میلی مولار لینالول ………………………………………………………… 40 شکل 4-2. مقایسه پتانسیل ثبت شده از یک نورون در سه زمان کنترل، 5 دقیقه و 10 دقیقه پس از افزودن لینالول ……………………………………………………………………… 42 شکل 4-3. الگوی فعالیت خودبخودی در شرایط کنترل، 3 دقیقه پس از مجاورت با غلظت 2/0 میلی مولار لینالول و پس از شستشوی محفظه حاوی لینالول با رینگر نرمال حلزون ……………………………………………………………………………………………….. 48 شکل4-4. مقایسه پتانسیل ثبت شده از یک نورون در دو زمان کنترل و 2 دقیقه پس از افزودن لینالول 2/0 میلی مولار ……………………………………………………………………..49 شکل 4-5. پس از بروز فعالیت burst در نتیجه افزودن لینالول 2/0 میلی مولار NiCl به محفظه ثبت اضافه گردید ………………………………………………………………………….. 52 شکل 4-6. پس از بروز فعالیت burst در نتیجه افزودن لینالول 2/0 میلی مولار، نیفدیپین به محفظه ثبت اضافه گردید ……………………………………………………..…….. 53 شکل 4-7. پس از بروز فعالیت burst در نتیجه افزودن لینایول 2/0 میلی مولار، H89 به محفظه ثبت اضافه گردید ………………………………………………………..……..………… 54 شکل 4-8. پس از بروز فعالیت burst در نتیجه افزودن لینالول 2/0 میلی مولار، کلریترین به محفظه ثبت اضافه گردید ……………………………………………….………….. 55 فهرست نمودارها و جدول­ها عنوان…………………………………………………………………………………………………………صفحه نمودار 4-1. مقایسه میانگین پتانسیل استراحت غشاء و فرکانس پتانسیل عمل در شرایط کنترل و در 5 و 10 دقیقه پس از افزودن غلظت 1/0 میلی مولار لینالول به رینگر حلزونی نرمال………………………………………………………………………………………..39 نمودار 4-2. مقایسه استانه و دامنه در پتانسیل عمل ثبت شده در حضور غلظت 1/0 میلی ­مولار لینالول …………………………………………………………………………………………. 41 نمودار 4-3. مقایسه میانگین سطح زیر منحنی، فاصله بین پتانسیل‌های عمل و طول مدت پتانسیل عمل در شرایط کنترل و در 5 و 10 دقیقه پس از افزودن غلظت 1/0 میلی مولار لینالول به رینگر حلزونی نرمال (8=n) ………………………………………….. 43 نمودار 4-4. مقایسه میانگین دامنه AHP و طول مدت AHP بین سه حالت کنترل، 5 و 10 دقیقه پس از کاربرد لینالول 1/0 میلی مولار (8=n) …………………………………… 44 نمودار 4-5. مقایسه میانگین شیب فاز دپلاریزاسیون و شیب فاز رپلاریزاسیون بین سه حالت کنترل، 5 و 10 دقیقه پس از افزودن لینالول 1/0 میلی مولار (8=n) …….. 45 نمودار 4-6. مقایسه میانگین مدت دوره مهاری بعد از فعالیت برانگیخته پس از تزریق جریان های دپلاریزان (nA1-2) در شرایط کنترل و 10 دقیقه پس از افزودن غلظت 1/0 میلی مولار لینالول به رینگر حلزونی نرمال (6=n) ……………………………………………. 46 نمودار 4-7. مقایسه آستانه و دامنه در پتانسیل های عمل ثبت شده در حضور غلظت 2/0 میلی مولار لینالول(6=n) …………………………………………………………………………. 47 نمودار 4-8.مقایسه میانگین شیب فاز دپلاریزاسیون و شیب فاز رپلاریزاسیون بین دو حالت کنترل و 2 دقیقه پس از افزودن لینالول 2/0 میلی مولار (8=n). ………….. 49 نمودار 4-9. مقایسه میانگین مدت دوره مهاری بعد از فعالیت برانگیخته پس از تزریق جریان‌های دپلاریزان(nA2-1) در شرایط کنترل و در 10 دقیقه پس از افزودن غلظت 2/0 میلی مولار لینالول به رینگر حلزونی نرمال (6=n)……………………………………….50 جدول 4-1. مقاومت ورودی سلول در شرایط کنترل و 10 دقیقه پس از کاربرد لینالول 1/0 میلی مولار ……………………………………………………………………………………………… 47 جدول 4-2. مقاومت ورودی سلول در شرایط کنترل و 10 دقیقه پس از کاربرد لینالول 2/0 میلی مولار ……………………………………………………………………………………………… 50 بیان مساله